Ключевые слова
Rosa alberta
Rosa spinosissima
метод на основе CTAB
ДНК
Как цитировать
Аннотация
Род Rosa включает ряд видов, имеющих важное экологическое и природоохранное значение. Однако получение высококачественной геномной ДНК из экстрактов листьев шиповника может быть затруднено из-за наличия вторичных метаболитов, способных препятствовать выделению ДНК и последующему молекулярному анализу. В данном исследовании оценивались эффективность и универсальность протокола выделения ДНК с использованием CTAB (цетилтриметиламмоний бромида) для листьев Rosa acicularis Lindl., Rosa alberta Regel и Rosa spinosissima L., собранных в Алтайском и Тарбагатайском регионах Казахстана. Геномную ДНК выделяли методом с использованием CTAB, а полученные результаты сравнивали с данными, полученными при использовании базового метода экстракции. Концентрацию ДНК измеряли спектрофотометрически. Различия между методами выделения анализировали с помощью t-критерия Уэлча.
Протокол с использованием CTAB позволил получить наибольшее количество ДНК в анализируемых образцах. Средняя концентрация ДНК варьировала от 188,95 до 385,24 нг/мкл в зависимости от вида и места сбора. Наивысшая средняя концентрация была отмечена у R. acicularis из Алтайского региона (385,24 ± 142,22 нг/мкл), а самая низкая — у R. spinosissima (188,95 ± 89,38 нг/мкл). Были выявлены значительные различия между отдельными образцами, особенно у R. alberta из Тарбагатая и R. spinosissima с Алтая. Образцы, обработанные базовым методом, в целом демонстрировали более низкое и более вариабельное содержание ДНК, различие между методами выделения было статистически значимым (p < 0,05).
Протокол на основе CTAB обеспечил выход ДНК, достаточный для молекулярного анализа изученных видов Rosa, и оказался пригодным для работы с растительным материалом из различных регионов Казахстана. Однако значительная вариабельность показателей между образцами свидетельствует о том, что одна лишь концентрация ДНК не в полной мере отражает ее качество. Для дальнейшего использования в молекулярно-биологических исследованиях рекомендуется дополнительная проверка чистоты ДНК и эффективности ПЦР-амплификации.